A lavagem das mãos é um procedimento simples e eficaz que reduz parte da sua contaminação e o risco de disseminação de doenças infecciosas. As creches, atualmente denominadas Centros de Educação Infantil, são áreas de propagação e disseminação de doenças, levando às infecções cruzada, sendo as mãos nesse caso um dos principais veículos de transmissão. O objetivo foi avaliar e orientar aos cuidadores sobre a técnica correta da lavagem das mãos e avaliar a eficácia da higienização das mãos, através de cultura microbiológica. Estudo quantitativo de caráter descritivo e exploratório. A coleta foi realizada em 3 Creches no norte do Paraná. Aplicou-se um questionário, treinamento e coleta de cultura das mãos, esfregaço com swab na região entre os dedos e digital semeadas em placas Ágar Tripcaseína e Ágar MacConkey, a contagem foi por UFC/mL. A pesquisa foi composta de 55 participantes do sexo feminino, sendo que 65% das entrevistadas não conheciam a técnica correta para a higienização das mãos e 35% conheciam, porém não sabiam executar todo o processo de forma correta. A coleta microbiológica mostrou que 8 amostras possuíram antes da lavagem das mãos coliformes totais na região digital, 58UFC e 11 na região interdigital, 122UFC. Após a lavagem das mãos o número de UFC da região digital caiu para 29 UFC e da região interdigital para 99 UFC. Conclui-se que todos os participantes, desconheciam as fases do processo de lavagem de mãos. Mesmo não conhecendo a técnica correta, todos os participantes da pesquisa julgaram importante a lavagem das mãos, tem consciência da sua importância, mas a adesão dos profissionais ainda não é satisfatória.