INTRODUÇÃO: A unidade de terapia intensiva neonatal desempenha papel essencial no cuidado de neonatos em estado crítico, altamente suscetíveis a infecções relacionadas à assistência à saúde devido a fatores como baixo peso ao nascer, procedimentos invasivos e alterações na microbiota pela flora hospitalar. A Educação Permanente em Saúde é essencial para prevenir tais infecções. OBJETIVO: Relatar a experiência de Educação Permanente sobre Higiene das Mãos na unidade de terapia intensiva neonatal. MÉTODO: Trata-se de um estudo descritivo, com abordagem qualitativa, do tipo relato de experiência, a partir da vivência de enfermeiros, que realizaram Educação Permanente em Saúde em um hospital terciário, no estado do Ceará, no mês de Maio de 2024. O público-alvo contou com profissionais de saúde da unidade do serviço de neonatologia. Foram utilizados recursos didáticos de educação permanente, ilha de demonstração dos 05 momentos de higiene de mãos e câmera escura para visualização da técnica de higiene de mãos, além de um slide educativo sobre o tema. RESULTADOS/DISCUSSÃO: A Educação Permanente em Saúde focada na higienização das mãos para prevenção de Infecções Relacionadas à Assistência em Saúde na neonatologia mostrou-se uma estratégia eficaz para a sensibilização e capacitação dos profissionais de saúde. A escolha da semana da campanha mundial de higiene das mãos como marco para o treinamento foi um fator positivo, pois aumentou a adesão e a sensibilização dos participantes, alinhando-se com as metas globais de saúde pública. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Conclui-se que a Educação Permanente em Saúde na neonatologia, focada na prevenção de Infecções Relacionadas à Assistência em Saúde, revelou-se uma prática essencial para a qualificação contínua dos profissionais de enfermagem. A combinação de abordagens teóricas e práticas, alinhadas às diretrizes do Ministério da Saúde e da Agência Nacional de Vigilância Sanitária, proporcionou um ambiente de aprendizado dinâmico e efetivo.