Introdução: A ocorrência das Infecções Relacionadas a Assistência à Saúde (IRAS), desencadeiam aumento da morbimortalidade e impactos financeiros aos serviços de saúde. A limpeza e desinfecção (L&D) de superfícies, quando realizada de maneira adequada, pode minimizar a propagação de microrganismos. Objetivo: Avaliar a correlação entre os métodos de monitoramento da limpeza/desinfecção: inspeção visual, adenosina trifosfato e unidades formadoras de colônias das superfícies de um Pronto Socorro. Método: Trata-se de um estudo prospectivo. A correlação entre os métodos de Adenosina Trifosfato (ATP) expresso em Unidades Relativas de Luz (RLU) e contagem de Unidade Formadora de Colônias (UFC), independentemente da fase avaliada foi avaliada pela aplicação do teste de correlação de Spearman. Optou-se pela escolha de superfícies com alta frequência de contato pelos pacientes ou profissionais. As avaliações das correlações consideraram os resultados dos métodos de monitoramento da limpeza antes e após a execução da limpeza/desinfecção de cinco superfícies. Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética e Pesquisa com Seres Humanos da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul. Resultados: Os resultados indicam a presença de correlação significativa entre os métodos de quantificação de ATP e contagem microbiana para a maçaneta da porta do banheiro feminino (p=0,526; p=0,008). Apesar de o valor p resultar significativo, em ambos os casos a correlação é mediana, pois o coeficiente foi inferior a 0,700, indicando que a correlação é linear e positiva para a superfície mencionada, ou seja, quanto maior a quantificação do ATP, maior será a contagem microbiana. Discussão: A avaliação do processo de (L&D) ainda ocorre em muitos serviços de saúde com a utilização de métodos subjetivos, É de suma importância a utilização de métodos de avaliação da limpeza e desinfecção que sejam menos subjetivos e permitam quantificar a nível de contaminação, sendo os métodos ATP e UFC, mais objetivos. Conclusão: Nesse estudo foi possível observar que quanto maior estava o nível de contaminação de ATP foi o UFC, nas superfícies maçaneta da porta do banheiro feminino.