A Doença de Hirschsprung é um processo patológico típico da faixa etária pediátrica clinicamente expresso por obstrução intestinal no período neonatal ou constipação intestinal grave no lactente e escolar. O objetivo do estudo foi discutir a utilização de biomarcadores imunohistoquimicos no diagnóstico da Doença de Hirschsprung. Trata-se de uma revisão integrativa da literatura, que utilizou os seguintes descritores: Disease Hirschsrprung and diagnosis; Doença de Hirschsrprung e diagnóstico, nas bases de dados LILACS, PUBMED e CINAHL. Dentre os critérios de inclusão, os artigos que: Relacionavam no título e ou resumo as formas de diagnósticos da Doença de Hirschsprung abordando os marcadores histoquímicos; Publicações entre os anos de 2004 e 2014; Texto completo disponível gratuitamente e artigos originais. Já os critérios de exclusão foram artigos que não estavam relacionados no título ou no resumo a temática e o diagnóstico da doença. Após estabelecer os critérios de inclusão e exclusão foram selecionados e analisados nove artigos. Com o estudo foi possível concluir que a acetilcolinesterase e a calretinina podem ser usadas no diagnóstico da Doença de Hirschsprung.